Tests de rétrovirus

Méthodes de détection

Principes de la méthode

Objectif réglementaire

Test de coculture

Cette méthode utilise des cellules indicatrices sensibles pour capturer les particules virales infectieuses et détermine l’état de contamination en observant des phénomènes tels que les effets cytopathiques, la formation focale ou l’expression d’un antigène spécifique. Il peut démontrer la présence de particules rétrovirales infectieuses.

• Cibles de test obligatoires : cellules EOPC ou cellules de production-à passage limité.

• Procédure de test de base : un système de coculture-en deux étapes-(phase d'amplification virale et phase d'indicateur d'activité) doit être utilisé.

• Exigences relatives aux cellules sensibles : en fonction de l'espèce et de l'origine des cellules testées, différentes ou plusieurs lignées cellulaires sensibles doivent être utilisées pour les tests d'infectivité rétrovirale.

• Exigences de passage de culture : le système de co-culture doit être passé au moins 5 fois (généralement plus) pour garantir une amplification adéquate du virus potentiel.

Microscopie électronique à transmission

Cette méthode utilise la microscopie électronique à transmission à haute résolution pour observer directement la morphologie et la structure des particules virales (telles que la structure typique de l'enveloppe icosaédrique et la morphologie de la nucléocapside), permettant une identification visuelle et une analyse quantitative. Il peut détecter les particules virales connues et inconnues, y compris les particules qui ne se reproduisent pas ou celles qui ne sont pas capturées par les tests d'infectiosité.

• Cibles de test obligatoires : cellules EOPC ou cellules de production-à passage limité.

• Exigence fondamentale : le type et la quantité de particules rétrovirales doivent être identifiés.

• Exigences en matière d'échantillons : des coupes ultrafines sont nécessaires, nécessitant généralement l'observation systématique d'au moins 200 cellules.

• Dispositions particulières (Pharmacopée chinoise 2025) : Pour certaines cellules de rongeurs (par exemple CHO, BHK-21) ou d'insectes, la quantité de particules virales dans le liquide de récolte et leur pouvoir infectieux doivent également être déterminés.

Test de transcriptase inverse

Basé sur la caractéristique de la transcriptase inverse catalysant la synthèse de l'ADN à partir d'une matrice d'ARN, la présence de rétrovirus peut être indirectement déterminée en détectant les signaux radioactifs ou fluorescents des produits de réaction pour quantifier l'activité enzymatique. Cette méthode est indépendante du pouvoir infectieux viral et peut largement détecter les particules virales ayant une activité enzymatique.

• Explication de l'exemption : L'ICH Q5A(R2) et la Pharmacopée chinoise (édition 2025) indiquent clairement que ce test n'est pas requis pour les cellules connues pour produire des rétrovirus (telles que certaines cellules de rongeurs, d'insectes et d'oiseaux).

• Exigences alternatives : En cas d'exemption, un test plus complet pour le type, la quantité et l'infectiosité des particules virales doit être effectué.

PCR ou autres méthodes spécifiques in vitro

En fonction de la spécificité d'espèce des cellules, lorsque les résultats de l'activité de la transcriptase inverse ne sont pas clairs ou ne peuvent pas être mesurés, des méthodes de détection de rétrovirus spécifiques à l'espèce peuvent être utilisées, telles que la PCR de rétrovirus, l'immunofluorescence, l'ELISA, etc. La PCR quantitative des rétrovirus peut également être utilisée pour la quantification des particules de rétrovirus.

• Positionnement primaire : généralement utilisé comme complément important aux méthodes de base mentionnées ci-dessus et comme outil de confirmation de spécificité.

• Scénarios d'application : couramment utilisés pour la détection et la quantification très sensibles de virus spécifiques connus (par exemple, qPCR), ou pour fournir des preuves au niveau moléculaire-lorsque les résultats d'infectiosité/microscopie électronique sont douteux.

• Base réglementaire : son application nécessite une validation approfondie et doit être conforme aux directives pertinentes pour la validation de méthodes de détection spécifiques sur le marché cible (par exemple, la Pharmacopée chinoise (édition 2025)).

Services professionnels

Une protection complète pour vous

Approche de conformité globale

Nos méthodes de test sont profondément intégrées aux exigences fondamentales de l'ICH Q5A(R2), de la Pharmacopée chinoise (2025), de l'USP et de l'EP, fournissant un service unique couvrant les tests d'infectiosité, la microscopie électronique à transmission (TEM) et la détection de l'activité de la transcriptase inverse, prenant efficacement en charge les applications simultanées dans plusieurs régions, dont la Chine, les États-Unis et l'Europe.

Capacité de détection à large-spectre

Nous disposons d'une variété de lignées cellulaires sensibles et de méthodes matures pour différents scénarios de risque, qui peuvent détecter efficacement les agents pathogènes cibles, notamment les rétrovirus murins, les rétrovirus à tropisme et les rétrovirus d'insectes, garantissant ainsi un large spectre et une spécificité de détection.

Propre plateforme de microscopie électronique

Nous disposons de notre propre-microscope électronique à transmission haute résolution et d'une équipe technique professionnelle expérimentée pour réaliser un contrôle qualité-en boucle fermée tout au long du processus, de la préparation des échantillons à la sortie des données. Nous pouvons également fournir des services quantitatifs rapides pour les matières premières (UPB) afin de prendre en charge avec précision la vérification de l'élimination des virus en aval.

Validation complète de la méthode

Toutes les méthodes sont appliquées selon les normes GMP/BPL, dans le strict respect de la Pharmacopée chinoise (édition 2025) et de l'ICH Q2(R2) pour une validation complète de la spécificité, des limites de détection, etc. Nous assurons une gestion de projet à cycle complet-, depuis la conception du protocole jusqu'à la prise en charge des applications, garantissant ainsi la conformité et la fiabilité des données.

Protection de l'intégrité des données

De la réception des échantillons et de l'exécution des expériences à l'émission du rapport, nous avons mis en place un système qualité complet conforme aux principes GMP et ALCOA+. Grâce à un examen professionnel des données à plusieurs niveaux-et à un mécanisme robuste de contrôle des écarts (CAPA), nous garantissons fondamentalement une livraison de haute-qualité et vérifiable pour chaque projet.